豬流感病毒H1N2亞型檢測試劑盒

豬流感病毒(Swine Influenza Virus, SIV)是豬呼吸道疾病的主要病原之一,目前已發(fā)現(xiàn)的豬流感病毒有H1N1、H1N2、H1N7、H2N3、H3N1、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1及H9N2亞型。我國從2004年分離到第1株H1N2豬流感病毒以來,連續(xù)又在不同省份分離到H1N2亞型重配豬流感病毒,這類病毒能否引起區(qū)域性的或者全國性的豬流感暴發(fā),值得更深一步研究。 本研究根據(jù)H1N2毒株的參考序列設(shè)計RT-PCR及測序引物,對本實驗室分離豬流感病毒H1N2亞型檢測試劑盒、鑒定的的兩株H1N2亞型豬流感病毒(SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07)進行了全基因組序列測定,并利用生物信息學(xué)軟件對其8個基因片段進行進化分析。結(jié)果SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07兩個分離毒株的親緣關(guān)系較遠(yuǎn),8個基因片段的同源性:PB2為81.4%,PB1為83.2%,PA為83.0%,HA為90.1%,NP為81.6%,NA為91.7%,M為84.1%,NS為80.4%。毒株SW/TJ/1/07的HA及NA基因與我國的第1株H1N2分離株(SW/ZJ/1/04)同源性*,其6個內(nèi)部基因分別與歐洲分離的兩株H1N1亞型豬流感病毒具有*的同源性;毒株SW/HeB/10/06的HA、NA及NS基因片段與禽流.感病毒A/Turkey/MO/24093/99(H1N2)同源性*;其它5個內(nèi)部基因分別與H1N1人流感病毒和H3N2及H1N2豬流感病毒的相應(yīng)基因片段具有*同源性,SW/HeB/10/06為我國分離到的第1株人-禽-豬流感基因三重配病毒。以上結(jié)果表明我國所出現(xiàn)的H1N2毒株遺傳背景較為復(fù)雜。 通過血凝抑制(HI)交互試驗,從實驗室分離的4株H1亞型豬流感病毒中篩選出一株具有抗原代表性的毒株SW/HeN/11/05 (H1N1)作為免疫原,制備抗H1亞型豬流感病毒的血凝素蛋白的單*抗體。將SW/HeN/11/05毒株接種9～11日齡雞胚進行增殖,收取尿囊液,濃縮、純化,與佐劑混勻,免疫6周齡BALB/c雌性小鼠,取免疫后小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合。采用HI和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法篩選陽性細(xì)胞*,經(jīng)連續(xù)多次*培養(yǎng)后獲得2株能穩(wěn)定分泌抗H1亞型HA蛋白特異性單*抗體的細(xì)胞株4E6B2和3E11C4。兩株單*抗體能夠與H1亞型豬流感病毒毒株發(fā)生特異性的反應(yīng),而與H3、H5、H9亞型豬流感病毒及其它常見豬病病原無交叉反應(yīng)。 總之,本研究分析了兩株H1N2亞型豬流感病毒的遺傳進化關(guān)系,為兩株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的重配豬流感病毒,這兩個H1N2亞型毒株的分離為豬作為混合器產(chǎn)生新型重配流感病毒提供了更進一步的證據(jù);同時,制備了兩株抗H1亞型豬流感病毒HA蛋白的單*抗體細(xì)胞株,為下一步建立H1亞型豬流感病毒診斷方法提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和條件。